慢病毒RNAi干扰实验原理

（1）原理
慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构，但也有不同于逆转录病毒的组份和特性，作为基因治疗载体发展起来，z近已用于转基因动物制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比。
一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

（2）服务流程
1）含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取；
2）慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞；
3）培养48~72h，收集培养上清；
4）病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）；
5）滴度测定、目的基因检定
6）将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。

客户提供
1）表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要Knockdown的靶基因的名称、序列；
2）所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化
3）若需要检测靶基因的表达变化，如需要请提供相应的抗体

我们提供
1）提供重组后的慢病毒载体质粒
2）提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的慢病毒储存液