细胞被支原体污染了会有哪些表现?
那如何检测你的细胞是否收到支原体的入侵呢?下面介绍了几种检测方式,或许对你的实验有用。
分离培养法
分离培养法是支原体检测的金标方法,其检测度高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样,并接种到适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体,它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长,终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果,因此被誉为支原体检测金标准。
但是,分离培养法也存在两个弊端,一是检测时间太长,支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类,分离培养法也有力所不及的时候,例如支原体M. hyorhinis。
DNA检测法,也称直接培养法
将可疑样品与指示细胞共同培养,一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞,如果原样本中含有支原体,那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时,就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。
但是这种方法灵敏度太低,当检测成阳性时,细胞经常已经严重污染。且Hoechst荧光染色:操作复杂,操作不当易造成假阳性或假阴性。
PCR法
PCR法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本,其PCR引物可特异扩增支原体基因组中rDNA保守序列,包括所有已知的支原体,及细胞培养过程普遍遇到的种属,例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和U. urealyticum。在凝胶电泳过程中,支原体DNA会显示为特异性条带,以此指示支原体的存在。
PCR法快速,简便,具有强扩增能力和极高的敏感性,可以检测大多数支原体,但谨慎起见好同时使用另一种检测方法来进行验证。PCR法检测支原体只需几个小时,是快但也是不灵敏的支原体检测方法。
酶学检测
酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中,在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP,随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。
后,建议你进行定期检测
支原体感染会影响细胞的正常生长,因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去,是细胞培养实验室应对支原体感染的关键