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ELISA试剂盒利用血清提取蛋白的方法及如何避免加样产生气泡

发布时间:2023-01-31 阅读:163

  ELISA试剂盒利用血清提取蛋白的方法及如何避免加样产生气泡

  进口elisa试剂盒使用血清提取蛋白是从血清中提取的蛋白质,适用于食物工业的食物增加剂和医药制剂。

  通常提取蛋白质的办法是离心分离,除掉血浆,使二价铁血红素酸化,并将其扫除。但是这种办法产量很低(100毫升血液仅可提取蛋白质约10)克。

  为了进步蛋白质得率,选用新的办法,即用每分钟2 500~3000转的速度 在15~30分钟内将血液进行离心分离,使醋酸和氯化钠的混合物(比值为2∶1~4∶1)酸化。在温度90~110℃下加热5~15分钟。冷却,再增加yi醚。


  制作办法:

  取经过安稳的血液,作离心分离15~30分钟,每分钟转速为2 500~3000转。从而获得固形物,去除血浆,用水使固形物沉渣溶解。置血红素于培养基中。为了使培养基酸化而使血红素分子中的二价铁血红素和血球蛋白的结合体分离 预先制备好醋酸和氯化钠的混合物 并将它加热到90~110℃。混合时将固形物的溶血产品缓慢地增加到加热的混合物中。从头把温度逐渐地升高到沸点,煮沸5~15分钟,以便使结合体彻底分离,接着将混合物逐步冷却到室温。

  为了使二价铁血红素溶解并消除,进口ELISA试剂盒在混合物中按溶物产品比值2∶1~5∶1增加yi醚。这时提取出来的蛋白质呈白棉絮状。将溶液过滤,再用yi醚清洗。

  100毫升血中提取的蛋白质产品相当于14.4克。使用这种办法,每100毫升的血液可进步蛋白质得率45。

  ELISA试剂盒如何避免加样产生气泡呢?

  通常气泡都是聚集在ELISA试剂盒酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到,加样时要避免出现气泡,这到底是什么原因呢?因为在做实验的过程中,有时为了打干净枪头里面的液体,很容易产生气泡,是不是这样对实验结果会后什么影响?

  1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。

  2.包被时有气泡的话,将导致包被不完全实际包被量下降--弱阳性甚至假阴性。

  3.封闭时有气泡的话,将导致大量未结合位点的存在,引起非特异性结合--本底增高,假阳性。

  4.加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性。

  5.加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性(竞争法相反----假阳性)。

  6.加显色液时有气泡的话---显色不完全。

  7.加终止液时有气泡的话(1、不能完全终止反应 2、影响酶标仪比色,OD值增高)

  8.洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能完全洗去,做无用功。

  避免方法:

  1.加样时尽量靠近孔底(不要接触孔底),用力均匀,不要过快过猛。

  2.封闭时一定要加满孔。

  3.洗涤时一定要加满孔(重要),气泡会浮上来*终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。

  进口ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。上海古朵生物公司中“古朵”取自good的音译,寓意是质量好,品牌好,服务好!欢迎新老客户洽谈!

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