蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书

  蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书

  注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

  产品内容:

  提取液：液体25mL×1 瓶，4℃保存。

  试剂一：粉剂0.1g×3 支，4℃保存。(使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10 个样品用量)

  试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

  试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

  试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。(自备)

  试剂六：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

  产品说明：

  蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。

  羰基与2,4-二硝基苯肼反应生成红色2,4-二硝基苯腙，在370nm 处有特征吸收峰。

  自备实验用品及仪器:

  天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、蒸馏水， 无水乙醇和乙酸乙酯。

  操作步骤：

  一、样品处理

  组织样品：称取约0.1g 组织样品，加入1mL提取液，充分匀浆后于4℃，5000rpm 离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，取上清，然后取20μL测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。

  三、计算公式

  1、按蛋白浓度计算：

  蛋白质羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370测定管-OD370空白管)÷(ε×d)×V÷(Cpr×V样品)

  =(OD370测定管-OD370空白管)÷4.4÷Cpr;

  2、按样本鲜重计算：

  蛋白质羰基含量(μmol/g鲜重)=(OD370测定管-OD370空白管)÷(ε×d)×V÷(W×V样品÷V提取)

  =(OD370测定管-OD370空白管)÷4÷W

  ε：蛋白质羰基消光系数，22mL•μmol-1•cm-1;d：比色皿光径，1cm;V：加入试剂六体积，1mL;V样品：加入样本体积，0.2mL;V提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL;Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g。

  注意事项：

  1.试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后4℃保存，若变为黑色，则不能使用。

  2.试剂二见光易分解，反应需严格避光。

  蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书 古朵既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。产品涵盖有机试剂、无机试剂和生 化试剂，标准物质、天然植物提取物及中药标准品，核酸、酶、缓冲剂、显色底物，医药中间体、原料药、催化剂、高纯溶剂、特种高分子材料及实验室常用耗材。 品种类超过2万种，广泛应用于细胞药理、药剂、分子生物学等科研领域。