古朵小课堂：多色免疫荧光为什么也叫做多重免疫组化?

  古朵小课堂：多色免疫荧光为什么也叫做多重免疫组化?

  多色荧光免疫组化

  多靶标免疫组化研究全套解决方案

  多靶点标记技术旨在同一张切片上同时检测多个靶标分子，从而进行不同靶标之间共表达和共定位分析、丰度检测、异质性分析、细胞表型统计以及复杂的组织微环境描述等。

  该技术是基于TSA(Tyramide Signal Amplification )酪胺信号放大技术的组织切片多重标记方案，利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记，提高检测的灵敏度，大幅提高信噪比甚至达千倍以上。它可使用同一动物来源的一抗，进行同一组织切片上多种marker的荧光多重标记。同时由于具有的信号放大性能，它可将信号强度完成10-100倍的信号提升，大大提高对于弱信号及不易标记的蛋白的探测灵敏度。

  Multiplex IHC，简称mIHC，直译多重免疫组化，也叫多重荧光组化、多色免疫荧光、荧光多色标记等，到底是组化还是荧光?初次接触的人有些懵，下面就要从它的原理给大家解释下，为什么呈现的是荧光图像而同时我们又称之为组化又没错,要想充分明白这个问题，我们从以下几个方面来解释：

  1-mIHC的基本原理

  mIHC实验是基于使用酪胺-荧光基团检测开发的。其实验步骤使用序列标记策略，每轮标记包含一抗孵育和二抗孵育。随后是酪胺-荧光基团偶联物沉淀。接下来将抗体hrp剥离，或在微波炉或者高温中加热，去除样本中的抗体，所有沉淀的荧光基团，仍与样本共价结合。mIHC的基本原理：内源性过氧化物酶封闭--抗原修复--一抗孵育--hrp二抗--显色(荧光显色沉淀)，由此可见，这基本就是免疫组化的经典原理;只不过mIHC重复了组化的两次(双标) 三次(三标)甚至六次(六标七色)，后一步再做个负染dapi(类似于组化的苏木素负染)!

  2-为什么使用多重而非单染色IHC?

  如果您的研究方向是探索不同细胞类型之间的交互作用，或者需要评价多个生物标志物和组织的表达或共定位，可以使用mIHC实验。

  3-mIHC实验的抗体使用

  使用经过高度验证的抗体，确保得到可靠的结果。通常而言经过IHC-P验证的抗体，同样也能在mIHC中使用，但需要再进行实验步骤优化。

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