ELISA测定试剂盒试验如何稀释血清？

导读：ELISA测定试剂盒是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技能之后发展起来的一种免疫酶技能。此项技能自70年代初面世以来，发展十分迅速，现在已被广泛用于生物学和医学科学的很多范畴。每一盒ELISA测定试剂盒里边都有一份对应的阐明书，而每一份阐明书里都会有写样本和稀释液的稀释份额，为何样本都需求稀释呢?
ELISA测定试剂盒试验血清为何要稀释？有两个原因：
1，竞赛按捺对比显着，应稀释竞赛物；
2，以下降非特异性反响，使特异性的抗原抗体反响充分体现出来。
血清稀释用通常的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，当然假如你嫌费事我觉得用生理盐水代替PBS联系也不大。不论你是用直接竞赛还是直接竞赛，血清的稀释倍数必定要事前确定，但也不必一点点，你做一个预试验即可，挑选OD在1.0左右的稀释倍数，即你的ELISA中阴性孔OD在1.0，这么作出来的曲线对比灵敏。
ELISA测定试剂盒试验稀释血清的步骤：
先把蛋白稀释必定的倍数，比如说10倍、20倍稀释（这么能够大体确定一个参数），将抗原进行一系列稀释包被微量反响板，再用必定稀释度的阳性参阅血清和阴性参阅血清进行孵育后洗刷，再加酶联系物进行反响，经孵育洗刷后，加底物溶液显色，停止反响后别离测定O.D值，挑选O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为适包被浓度。通常老是要挑选那个O.D值稍大于1.0，而不挑选小于1.0的抗原浓度。阴性参阅血清O.D值请求<0.1-0.2。也就是请求阳性参阅血清和阴性参阅血清的O.D值有显着差别。
ELISA测定试剂盒是以免疫学反响为基础，将抗原、牽9体的特异性反响与酶对底物的催化作用相联系起来的一种敏感性很高的实验技能。因为抗原、抗体的反响在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每参加一种试剂孵育后，可经过洗刷除掉剩余的游离反响物，然后保证实验成果的特异性与稳定性。在实践使用中，经过不一样的规划，详细的方法步骤可有多种。