其实没那么复杂：疑难样本核酸提取指南

相信大家在研究过程中总会遇到一些「奇葩」样本，他们就像拦路虎一样，总是在找我们的麻烦。DNA 提取得率低，RNA 提出总是降解，这些样本躲又躲不开，绕又绕不过，提还提不出来简直就是烦死个人！

 

其实没那么复杂，静下心来仔细思考一下提取过程就能理出一条线索，解决这个问题。先是样本的裂解或者破碎，很多疑难样本在这一步就已经挡在了我们的面前，比如某些植物的根部以及较为坚韧的茎部等。这些样本破碎起来特别困难，尤其是当大量样品需要处理的时候，我们经常会选择通量较高的钢珠打样器，当然还有传统的液氮研磨，但这两种方法要么费时间，要么打不透，这个时候我们就需要一些新的思路，比如使用纤维素酶或者果胶酶处理，电动组织研磨器等等。

 

破碎之后我们需要裂解细胞，目前常用的方法有 SDS（十二烷基硫酸钠）法和 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法，SDS 法比较温和，容易保证 DNA 的完整性，而 CTAB 法则较为强烈，当植物样本成分复杂，多糖多酚含量较高时，一般会选用 CTAB 来进行裂解。

 

有一些样本比较恶心，比如痰液、精液等，这类样本的特点是比较粘稠，提取前需要我们将它们稀释，以痰液的为例，需要加入 DTT（二硫苏糖醇）、Sacomanno 液（乙醇、聚乙二醇、利福平混合液）来液化；而精液 DNA 提取对象大多是精子，需要将精液离心后用 SWB（10 nmol Tris-HCl，10 mmol EDTA，1mol NaCl，pH 7.0）洗涤，接下来利用 SDS、DTT 解离，再用蛋白酶 K 消化。

 
DNA 提取的下一步是沉淀，而如果使用试剂盒就是上柱。相信许多同学在提取 DNA 的时候都在使用试剂盒，的确，自从核酸提取进入了试剂盒时代之后，我们提取的效率大幅度提升。但是也出现了另一个问题，那就是在有限的样本量的前提下，我们如何能够抓取到痕量的核酸呢？以提取血清血浆样本中的游离核酸为例，常规的试剂盒很难处理这样的情况，需要试剂盒中配备一些特殊组份来捕捉这些游离核酸，并帮助其结合在柱膜上，所以大家在购买试剂盒的时候需要做好选择。

 

接下来就是洗脱或者溶解了，目前市面上所售的各种试剂盒大多采用硅基质膜，这种膜的特点是在高 pH 值条件下与核酸分离，所以我们如果不选择试剂盒中的洗脱液的话，我们可以用 pH 7.5-8.0 的水来代替，可以根据自己的需求来调整洗脱量，但洗脱时需要将膜完全覆盖，这样才能保证洗脱的率。这么看来，DNA 提取的过程是不是很清晰呢？