主营产品: 科研人类ELISA试剂盒说明书,大鼠ELISA试剂盒代测,小鼠ELISA试剂盒厂家
产品分类

公司名称:上海樊克生物科技有限公司

公司地址:上海市嘉定区曹安公路5588号

邮政编码:

公司电话:13621980056

公司传真:021-50760790

电子邮件:272967093@qq.com

联 系 人:洛辰 ( 女士 )

部门(职位):

手机号码:13621980056

即时通讯:        

公司新闻

抗生素检定用芽孢悬液的制备及注意事项

发布时间:2018-11-28 阅读:14

管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法,利用管碟法测定抗生素效价,具有准确、直观、重复性好等优点,因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多,任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差,导致整组试验失败。其中,芽孢悬液的制备就有很多需要注意的地方。

在用管碟法检定抗生素时,需要将菌悬液与培养基混合均匀、覆盖在底层培养基上,以形成抑菌圈。其中,对于菌悬液的制备要求为:

将所用菌的斜面培养物用 1~2 ml 灭菌水洗下,形成菌悬液;将菌悬液在营养琼脂平皿上均匀涂布,置于 35~37℃ 条件下培养 7 天;涂片、染色,镜检芽孢率 ≥ 85% 时,用 10 ml 灭菌水将芽孢和菌体的混合物洗下,制成悬液;65℃ 水浴加热 30 min,杀死菌体,形成有活性的芽孢悬液;冷却、冰箱中保存备用。

 

 

 

根据实际操作中的经验,对这一环节需要注意的事项总结如下:

1 应该严格按照标准操作,将涂好的平皿连续培养 7 天再洗脱芽孢,这样也有助于芽孢悬液的均一性,避免由于操作标准不一造成的试验结果的偏差。有文章报道,将平板培养至 2、3、4、5、6 天与培养至第七天,制成的悬液在抗生素效价测定中无差异;但本人在实际试验中发现,培养 3 天的短小芽孢菌,镜检时芽孢率<80%, 并且平皿一旦从培养箱中拿出来,室温放置至第 10 天,芽孢率也不会再发生明显变化,这显然不符合《中国兽药典》规定的芽孢率 ≥ 85% 的要求。

2 试验菌的菌龄对抑菌圈有一定影响。故检定时应保持菌种及菌液的新鲜。一般菌种一月转种一次,冰箱冷藏保存。对易变异的菌株,如藤黄微球菌等在制备菌悬液前进行单菌分离;其他菌株可半年分离一次。

3 试验菌传代不超过 5 次,以防止菌种老化变异。芽孢杆菌培养物用灭菌水洗下后,应在 65℃ 加热 30 分钟,使菌体的菌龄一致(有资料显示可 70~75℃ 水浴 30 min 杀死菌体)。

4 加入菌悬液的体积,一般不少于 0.3 ml,并且不大于上层培养基体积的 1%(有资料说不大于 2%)。如果加入菌悬液的体积过小,则在同次实验中,不同次加入菌悬液的体积相差较大, 造成实验误差;如果加入菌悬液的体积过大,则会使上层培养基变稀,并且因菌悬液的温度较低,加至培养基中可能造成培养基结块,影响测定结果。对于加入菌悬液体积的控制,可通过调节菌悬液的浓度来实现。

在线客服

联系人:洛辰
QQ:
电话:13621980056
手机:13621980056