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ELISA实验中样本的收集和运输

发布时间:2018-12-10 阅读:53

     酶联免疫吸附实验(ELISA)可以用于:(1)检测大分子抗原和特异性抗体等;(2)具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

      ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。


ELISA的样本收集与运输:

利用ELISA进行检验常见的样本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,**,**分泌物等,这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

ELISA实验中的血清需采用血管收集血液,室温血液自然凝固30分钟,1000xg离心15分钟左右,收集上清,分装后,标好号,-20°C或-80°C保存。运输是用干冰。(注:一个样本检测一个指标至少需要40ul血清,您是一个样本检测4个指标,至少需要160ul血清,多准备一些。)

光镜:肝脏组织4%多聚甲醛固定后密封,4度或者常温保存即可,运输时用冰袋。

电镜:一定要是新鲜的组织加到新鲜配置的2.5%戊二醛中固定后,4度保存,电镜所需的组织块不需要太大,米粒大小即可,运输时用冰袋即可。

免疫组化:取适当的组织放于4%的多聚甲醛中固定,密封,避光,四度或常温保存,运输时加冰袋即可。

RT-PCR和WB:取下肝脏组织,置于-80或者液氮中保存,运输时用泡沫保温盒加干冰。


注意事项:

     血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。


     按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

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