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讲解人ELISA检测试剂盒的正确操作步骤

发布时间:2018-12-14 阅读:201

    人ELISA检测试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗BP180抗体(BP180-Ab)的含量。如血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。今天,我们主要讲解人ELISA检测试剂盒的正确操作步骤:

    1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

    2、设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

    3、待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL。

    4、随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

    6、所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7、所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

    注意事项:人ELISA检测试剂盒在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用;实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存;浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,zui终结果乘以5才是样本实际浓度;严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。


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