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如何学会分离培养人的真皮成纤维细胞?

发布时间:2019-01-07 阅读:23

真皮成纤维细胞(又称皮肤成纤维细胞)属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织,真皮成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞,由于这些细胞非常容易培养,它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。

一般而言,成纤维细胞能够分泌I型和 III 型胶原等细胞外基质,并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。

伤口修复时,真皮成纤维细胞由可增殖,可迁移的表型变为有收缩性的,可重塑基质的表型,同时,它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。



以下是樊克提供的一种人真皮成纤维细胞的制备方式(仅供参考):

    首先在分离真皮成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行,打开生物安全柜紫外灯 30min 作无菌处理。

    将手术废弃的皮肤组织浸泡 75% 酒精,消毒 2min,

    将皮肤组织置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍,

    然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等,

    将皮肤剪成 0.5*0.5 cm 小块,放入 dish 中,加 0.1% 的 dispase 溶液,封口膜封口,4℃ 冰箱过夜消化,

    第二天,用镊子将表皮与真皮分开(薄的那层是表皮,厚的那层是真皮),

    将真皮剪碎,移至离心管,用 0.1% 胶原 Ⅰ 型酶+0.1% 胶原Ⅱ型酶+0.1% 胶原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴锅中消化至少 2 h(视消化程度而定),

    用 100 μm 网筛过滤,

    取滤液,300 g,离心5 min,

    用完全培养基重悬沉淀,

    铺瓶,

    隔天换液。

以上是皮肤成纤维细胞分离培养的一种方式,不同的技术人员分离培养的方法也不同,使用的试剂比例也不尽相同,皮肤成纤维细胞特异性纤维连接蛋白或波形蛋白表达检测,采用细胞免疫荧光技术。细胞纯度可高达于 90%,所有的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。


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