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如何检测GFP、GFP、YFP、EYFP、CFP抗体?

发布时间:2019-01-07 阅读:15

GFP是绿色萤光蛋白(Green Fluorescent Protein)的简称,由238个氨基酸残基组成。GFP蛋白质*早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。GFP或其突变体EGFP标签系统等被广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分布。我们都知道GFP抗体能应用于GFP的表达检测、纯化以及定位分析。那么该如何检测GFP其他的一些突变体,如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表达和定位呢?


 

 

我们来看一下GFP标签与其它突变体标签的关系。YFP(Yellow Fluorescent Protein)是黄色荧光蛋白,其序列与GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代,这样的GFP不发出绿色荧光,而发出较长波长的黄色荧光,也就是YFP。因此两者的区别则是发射波长了,在其他序列上没有区别。而EGFP是增强型的GFP,发生了双氨基酸取代,Leu(亮氨酸)取代GFP上的Phe64(苯丙氨酸),Thr(苏氨酸)取代了GFP上的Ser65(丝氨酸),与GFP相比,具有更强更稳定的绿色荧光。CFP(Cyan Fluorescent Protein)与此类似,也是GFP第66位上的酪氨酸Tyr被色氨酸(Thr)所取代的结果,发蓝色荧光。由此可见,GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似,只有1-2个氨基酸残基的变化。


EarthOx GFP标签抗体用于IF实验 EarthOx GFP标签抗体用于WB实验,1道为阴性对照,2道为1:1000倍稀释

我们先看一下EarthOx的单克隆GFP抗体——Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R],其免疫原是KLH偶联的水母GFP蛋白的N末端多肽,由于EGFP、YFP、EYFP、CFP得N末端序列与GFP几乎完全一致,因此从免疫原上来说,GFP与EGFP、YFP、EYFP、CFP没有区别。更重要的是,EarthOx对于该单克隆抗体还进行了明确的验证试验,试验也表明该Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody均能与GFP、YFP、EYFP、CFP等突变体有交叉反应,可以用于GFP、YFP、EYFP、CFP等荧光蛋白的表达定量、定位分析和检测。EarthOx该GFP标签抗体的另一个优势是,可用于的试验类型很多,除了基本的WB、ELISA试验外,还可以用于免疫细胞化学、免疫荧光(ICC/IF)、免疫共沉淀(IP)等。该抗体的效价很高,EarthOx的推荐WB起始稀释比率为1:1000,实际应用于中还能有更优异的表现。因此,EarthOx的Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R]不仅可以用于GFP,还能应用于GFP其他的一些突变体,如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表达和定位等实验。


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