实验室常见的支原体检测方法你了解吗?

     支原体是一类能自我复制的zui小的原核生物，可透过一般过滤膜且对抗生素具有一定耐药性，是原代细胞跟传代细胞的常见污染物，其会改变细胞的 DNA、RNA 及蛋白表达。
 
     支原体污染严重危害科研学者们的劳动成果，早发现早处理，把损失降到zui低。《药典三部 2015 版》-3301 支原体检验-要求应同时进行培养法和指示细胞培养法（DNA 染色法），也可采用检验机构认可得其他办法。这里笔者来简单介绍一下目前实验室常见的支原体检测方法：

 
1.培养法

培养法是通过将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖，然后再转接种到支原体固体培养基中，培养一段时间后（大约一个月），如果固体培养中出现典型的支原体菌落，则说明待测样品有支原体污染。

2、RD-RCA 恒温法（MycoBlue Mycoplasma Detector）

吸取 1 ul 细胞培养上清液加入到反应体系中，孵育 1 小时，若细胞培养物被支原体污染，支原体 DNA 保守系列会被等温 DNA 聚合酶特异性扩增，使得反应液由紫色变成天蓝色。肉眼可观察。

3.荧光染色法（Mycoplasma Stain Assay Kit）

该方法主要是能与 DNA 特异性结合的荧光染料 Hoechst33342 或 Hoechst33258，可使支原体内 DNA 着色，染色后可用荧光显微镜观察。

4.酶活法（TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit）
 
     支原体溶解时释放出来的酶与 TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit 中提供的底物发生催化反应，将 ADP 转化成 ATP，而 ATP 含量的上升，能通过生物发光化学反应检测，并通过分光光度计进行读数，从而达到检测支原体的目的。
 
5. PCR 法（Genloci-Mycoplasma Detection Kit）
      
     利用对支原体基因组中保守的编码域序列进行 PCR 检测的方法来进行支原体检测的。

      除此之外还有相差显微镜法和电镜扫描法，不过，因其限制因素较大，在此不进行说明。
zui后，单独使用目前市场上任何一种支原体检测试剂盒，都无法做到 准确。严格的支原体检测，应至少使用二种及以上检验方法来确定检验准确性。