细胞冻存方法及目的你了解吗?

把细胞消化下来(同5)并离心。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管里，4℃冰箱30min，-20℃30min，-80℃过夜，写明细胞种类，冻存日期。然后放到液氮灌中保存。

冻存液的配制：50%的完全培养基+40%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

培养细胞基本形态

培养细胞zui常见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。细胞在生长期常有1-2 个核仁。在细胞机能状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等，表明细胞代谢不良。体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支持物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。

哺乳动物细胞冷冻保存

主要目的：

（1）保存种子细胞，以便随时取用。这是保存细胞的zui主要目的。

（2）减少细胞被微生物污染的危险性。

（3）减少细胞之间交叉污染的危险性。

（4）减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。

（5）避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。

(6) 降低人力和物力。

冷冻保存细胞的解冻与复苏要点：慢冻快融

（1）快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入 37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在 1 分钟内全部融化（不要超过 3 分钟）。

（2）解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱，不仅解冻速度要快，而且动作要轻。一般情况下，解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养（1ml 冻存细胞液加入到 25－30ml 新鲜完全培养液中），24 小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液，以去除 DMSO。如果，细胞对冷冻保护剂特别敏感，那么，解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。

特别注意：

（1）解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂。，要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入 37℃水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。

（2）冷冻管在水浴中解冻时，要将冻存管盖子拧紧，确定拧紧后再投入水浴锅中，注意液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染。