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同样是慢病毒感染细胞,为什么你的效率那么低!

发布时间:2019-04-08 阅读:18

     慢病毒不但可感染分裂或非分裂细胞,还可将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达,又很少引发机体免疫反应。被誉为「细胞实验首.选、体内实验必备」工具病毒。

     并且作为基因载体在治疗各类遗传性和后天性的人类疾病中倍受欢迎:从基础研究发展到临床阶段,高浓度、高感染效率的慢病毒都是感染细胞表达(或沉默)目的基因的理想分子工具。

那么慢病毒在感染细胞中有什么优良表现呢?

慢病毒感染细胞的步骤一般是这个样子的,以「24 孔培养板、贴壁细胞」为例:

Day0: 接种细胞
每孔按 5×104 个待感染细胞铺板,用含有 10% FBS 的 DMEM 培养基培养;

Day1: 细胞感染
感染前,根据说明书用完全培养基配置感染液,备用吸掉旧培养基,更换为感染液; 并参考细胞 MOI 值,计算病毒使用量,加入病毒进行感染,混匀;

Day2
病毒感染 8~16 h 后,换回常规培养基,继续培养;

Day3~4: 确认感染效果
感染 72 h 后,显微镜下观察感染效果,如 EGFP、Cherry 的表达情况;

如果都这么简单的话,那你真的是 too young too simple!

那么在慢病毒感染细胞过程中,到底会遇到哪些问题呢?此贴统统帮您搞定~~

难感染问题该如何解决?

对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,可以通过添加病毒感染增强液来显著提高转染效率。



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