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樊克生物讲解:ELISA实验出现异常的原因分析

发布时间:2019-04-28 阅读:76

  ELISA实验是我们大家zui常见的实验,也是比较容易出问题的实验,可能你一不小心,你的整个实验便是无功能重来那!所以樊克小编给您讲解在使用ELISA试剂盒做实验的时候,有些细节若是做不好会出现实验异常,或者效果不佳,那么你有想过是什么原因吗?

一、白板异常:显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。

1. 试剂已过效期,或不同试剂盒组分混用(解决方式:检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用)。

2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B(解决方式:严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象)。

3. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力(解决方式:确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净)。

4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制(解决方式:每次配制时都应看清标签标明物质)。5. 蒸馏水有问题(解决方式:确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染,与好蒸馏水比较)。·显色弱、灵敏度低:实验结束后,包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。

二、阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。

1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本,但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出(解决方式:质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的,可存于 2-8℃,如需长期保存,应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装,并置于-20℃以下保存)。

2. 质控品或标本高温放置过久,或被反复冻融致待测物滴度下降,而未能检出(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。

3. 仪器设定不正确,滤光片不匹配(解决方式:重新设定酶标仪的参数,特别是检查滤光片是否匹配)。

三、实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但临床标本感觉显色较弱

1. 待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的(解决方式:如有怀疑,可复检)。

2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂(解决方式:酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂)。

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