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白介素检测试剂盒试验操作要点

发布时间:2019-05-06 阅读:155

白介素检测试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定样品中人白介素的水平。向预先包被了人白介素单克隆抗体的酶标孔中加入白介素,温育;温育后,加入生物素标记的抗白介素抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中人白介素的浓度呈正相关。试剂盒的合理操作尤为重要,以下是白介素检测试剂盒试验操作要点,为了确保实验的成功大家有必要了解一下!

1、为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

2、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

3、配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,zui好使用微量振荡器(使用zui低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀。

4、各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

5、实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热。

6、手工洗板应注意:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

7、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

8、每次试验测定的同时做标准曲线。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔zui高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n)。

9、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

10、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。

11、从2-8℃取出的白介素检测试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

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