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白介素ELISA检测试剂盒的测定原理

发布时间:2019-06-03 阅读:127

白介素ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心法作为测定的方法时,试剂盒的组成一般包括:已包被单抗的酶标板:一块,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有铝箔袋密封,打开后有干燥剂,实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。今天我们主要介绍其测定原理。

现在白介素ELISA检测试剂盒除非是测定抗体的以外,一般使用的是双抗体夹心法,此种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法,即使用生物素-亲和素系统,还有少数的指标可能使用竞争法,这类方法适用于半抗原的测定。

具有复杂结构的多表位蛋白抗原,其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗,否则背景很高。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位),那么测定的线性范围就较宽,试剂盒性能就较好;一个用单抗,一个用多抗,测定的灵敏度会较高。

某些简单的化合物用白介素ELISA检测试剂盒测定时,因为没有两个或以上的表位,一般只能作为半抗原,只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用双抗体夹心法作测定原理时,这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。

一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形,随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色,即所谓的“钩状效应”,也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”。所以当使用一步双抗体夹心法时,样品浓度太高,有时会出现测不出来的现象,此时要作适当的稀释才能准确测定。

试验中,白介素ELISA检测试剂盒的每一步操作都有可能影响实验的成功与否,所以一定要确保操作方法正确,尤其要注意相关的细节问题!


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