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解析为何纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样

发布时间:2019-07-18 阅读:162

  蛋白质作为生命活动中起重要作用的生物大分子,与一切揭开生命奥秘的重大研究课题都有密切的关系。蛋白质是人类和其他动物的主要食物成分,高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要标志之一。以下针对纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样作分析:

客户问:

用大肠杆菌表达纯化的蛋白,和人血清中这种蛋白的分子量不同,western显示血清中这种蛋白的分子量高于纯化的蛋白,请问如何解释呢?

技术答:

1  可能人血清中的蛋白是被修饰了的,如糖基化以及其他可以影响分子量的修饰。不知道血清中的分子量比你纯化的大多少KD?

2  检查一下蛋白序列中有没有糖基化位点。大肠杆菌不能糖基化。

3  不知道如何确定是否用糖基化位点呢?血清中分子量比纯化的高个2~3kd吧,这是糖基化么?

4  N即Asparagine Asp
X即任意氨基酸
T即Threonine Thr
S即Serine Ser
NXT NXS即在氨基酸一级结构中有Asp-X-Thr或Asp-X-Ser序列则会被糖基化。
查文献我建议可查其蛋白质性质研究方面的文献,或以蛋白+糖基化作关键词尝试查询。你关注生物活性时可不能忽略糖基化这一点哦,往往糖基化是很多蛋白折叠和实现活性的重要因素。

5  糖基化分三种,N糖基化有特殊识别序列N-X-S/T,O糖基化发生位点迄今尚无明确规律,糖基磷脂酰肌醇锚定一般是定位在细胞膜上,可能血清中的蛋白是没有的。由于糖基化不是由模板合成,表现出微观不均一性,因此其分子量是有一定变化。
  一般可预测N糖基化位点,如果存在N-X-S或N-X-T序列,则基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相关文献,如果你做的蛋白是已知的,一般都会有文献报道糖基化分三种,N糖基化有特殊识别序列N-X-S/T,O糖基化发生位点迄今尚无明确规律,糖基磷脂酰肌醇锚定一般是定位在细胞膜上,可能血清中的蛋白是没有的。由于糖基化不是由模板合成,表现出微观不均一性,因此其分子量是有一定变化。
  一般可预测N糖基化位点,如果存在N-X-S或N-X-T序列,则基本上都是要被糖基化的。zui好能查找一下相关文献,如果你做的蛋白是已知的,一般都会有文献报道。。

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