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6招教你选择正确的ELISA试剂盒

发布时间:2019-08-02 阅读:349

只有正确选用试剂盒,实验才能变得轻松。市场上的试剂盒品牌诸多,价格各异,质量参差不齐,那么该如何选择优质的试剂盒呢?只需6招,教你搞定ELISA试剂盒的选择。

1、明确研究种属
一般来说,厂家都会在产品名称上标明种属,且为首个单词,检索种属的常用语言为英文。如下列的 VEGF ELISA 试剂盒(R&D Systems®,货号 DVE00)的首个单词为 human,即表明目标种属为人。
R&D Systems® ELISA 试剂盒所涵盖的种属,种类达 16 种之多。主要有:人(Human)、小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea Pig)、犬(Canine)、猪(Porcine)、马(Equine)、猫(Feline)、牛(Bovine)、棉鼠(Cotton Rat)、病毒(Viral)、恒河猴(Rhesus Macaque)、兔(Rabbit)、肉毒梭菌(C.botulinum)、山羊(Goat)。
(1)一个 ELISA 试剂盒,多个种属
如果您需对不同物种的同一因子进行定量,建议优先寻找适用于多个种属的 ELISA 试剂盒,产品介绍中会注明「Multi-species」。如 Endothelin-1 ELISA 试剂盒(R&D Systems®,货号 DET100)能够定量检测人、大鼠、小鼠的细胞培养上清、血清血浆及尿液等样本中的 Endothelin-1 蛋白。
(2)研究的种属没有对应的 ELISA 试剂盒,怎么破?
① 前人摘树,后人乘凉,看看别人是否验证过相关种属。R&D Systems®官网上,在发表文献(Citation)的下方,有一个筛选框,可查看发表文献中使用该产品研究的种属及样本信息。如 Human IL-6 ELISA 试剂盒(货号 D6050),在人、大鼠、小鼠、非人灵长类、兔等种属中均有过实验记录,不妨一试。
② 联系厂家技术部门,获取目标种属与试剂盒验证种属之间的交叉反应性实验数据,R&D Systems® 的试剂盒说明书「Specificity」部分,会详细描述目标因子与相近因子的交叉反应结果,反应性高的,可自行验证。
③ 联系厂家定制 ELISA 试剂盒。
④ 如果觉得自己的技术经验过关,可以选择抗体对自行开发,不少厂家均提供适用于 ELISA 开发的抗体对(点击查看 R&D Systems® 抗体对列表)。

2、明确样本类型
不同厂家验证样本类型不同,即使同一厂家不同试剂盒,其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本,根据样本处理方式的差异,分为 EDTA 血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆,因此购买前需仔细核对。

3、预测目标因子的浓度
一般来说,待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围,且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子 IL-6,正常人血清中浓度为 3.13 pg/mL,病人会显著增高,CAR-T 回输病人血清中的 IL-6 浓度甚至为正常人的 200 倍以上。
因而,必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。若浓度太低,可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大,建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。
如同样为IL-6 ELISA 试剂盒,各类型检测范围差异较大,需要根据实际情况选择合适的试剂盒:

4、检查试剂盒进行过哪些质控?
质控数据在说明书中即可找到,在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验。比如 R&D Systems® 的 Quantikine® 系列试剂盒,每一个产品在面市前,均需要经过批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)的精密度检测、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试,从而确保超强的结果重现性及准确性。

5、确定需检测的因子数量
如果待测因子超过5个,且样本量较小时,单因子ELISA检测方法并不是zui佳选择。建议考虑多因子检测方法,如固相芯片(样本数量一般5个以内,检测指标可达上百个)及 Luminex 液相芯片方法 (检测样本多达 80个,检测指标多达 50 个)或微流控ELISA检测系统 Ella。可节约样本及时间成本,也可保证检测结果准确。

6、预算评估

预算往往是大家优先考虑的,实际上,不能够一味讲究产品价格,更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学,一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中必不可少的因素,即使低廉的价格,不能够完美重现结果,也是资源的另一种浪费。








 

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