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猪蓝耳抗体ELISA检测试剂盒上市啦!

发布时间:2019-08-12 阅读:86

猪蓝耳抗体ELISA检测试剂盒用于检测血清样品中的猪蓝耳病毒抗体水平。

一、原理简介
本试剂盒采用间接ELISA检测血清中的蓝耳病毒(PRRSV)抗体。其基本原理如下:用N蛋白抗原制备包被微孔板,HRP酶标记物为抗猪IgG。检测时,向微孔板中加入稀释后的待测样品,洗板后,加入HRP标记抗体,如果血清中含有蓝耳抗体,则抗体会与酶标板上的包被的抗原结合,酶标抗体也会与血清中的蓝耳抗体结合,加入底物后,颜色反应的深浅与样品中存在的蓝耳抗体的量成正比。

二、试剂盒组份
包被板:192T(12条´8孔,2块)。
酶标记物:20.0ml/瓶,1瓶。
样品稀释液:60ml/瓶,1瓶。可作为阴性质控使用。
阳性质控:1.80ml/瓶,1瓶。含有蓝耳抗体。
洗液:60ml/瓶,1瓶。20倍浓缩液,用前稀释。
底物A:、:12.0ml/瓶,1瓶。含有过氧化氢的缓冲液。 
底物B:12.0ml/瓶,1瓶。含有TMB的缓冲液。
终止液:12.0ml/瓶,1瓶。含有硫酸的缓冲液。
板贴、说明书、自封袋:1套。

三、注意事项
不同批次的组份不可混用,且只能在效期内使用。
如果待检标本含有悬浮物、絮状物等不溶物,请离心去除。且含有叠氮钠的标本不可用。

四、试剂准备
测试前将试剂盒组份置于室温(18-25℃)平衡30分钟,测试后应立即放回2-8℃保存。
洗涤液:将浓缩洗液按照20倍比例用蒸馏水稀释,混匀后备用。
样品准备:按照常规方法制备血清,用试剂盒中配套的稀释液稀释,样品按照1:60稀释。(比如:5µl样品加入到295µl样品稀释液中)

五、检测步骤:
取出所需要的板条。剩余的板条装入自封袋中,置于2-8℃保存。
先向每孔中加入100µl稀释后的待测样品、阴性质控(样品稀释液)、阳性质控(不稀释),其中阴性质控重复加两孔,阳性质控重复加两孔。
轻轻震动10-20秒混匀,贴上板贴。
置于37℃水浴锅中温育30分钟。扣除孔中液体,并用洗液洗涤5-7次。在干净的纸巾或毛巾上拍干,尽量去除残留的水分。
每孔中加入100µl的酶标记物,轻轻震动10-20秒混匀,贴上板贴。
置于37℃水浴锅中温育30分钟。扣除孔中液体,并用洗液洗涤5-7次。在干净的纸巾或毛巾上拍干,尽量去除残留的水分。
每孔依次加入50µl底物A和50µl底物B,轻轻震动10-20秒,置于37℃,避光反应15分钟。
每孔加入50µl终止液,轻轻震动几次混匀。使蓝色液体完全变为黄色液体。
在10分钟内,测量450nm处的吸光度(OD450)。

六、结果判断及计算:
1、阴阳性质控平均值计算
阳性质控平均值 =(阳性质控1+阳性质控2)/2
阴性质控平均值= (阴性质控1+阴性质控2)/2
2、实验有效性判定:应满足,
阳性质控平均值 – 阴性质控平均值 >= 0.150
阴性质控平均值<=0.450
3、样品S/P值计算:
S/P=(样品A- 阴性质控平均值)/(阳性质控平均值 – 阴性质控平均值)
4、结果判定:
阴性:S/P<0.50;阳性:S/P >= 0.50。

七、储存条件及效期
2-8℃保存,有效期为6个月。

八、与进口elisa试剂盒比对
在一次实验中检测113份样品,同时用美国进口ELISA试剂盒做对比,总符合率超过99%,只有一份样品略有差异。










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