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您的ELISA试剂盒实验失败的原因究竟是什么?

发布时间:2019-09-02 阅读:58

现在的elisa试剂盒可谓鱼龙混杂,难辨好坏,因为具有灵敏度高、特异性强,操作方法简便快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点,已经被许多的科研朋友所应用,虽说是操作简便快速,但是稍稍的不注意,实验就可能会失败,今天,上海古朵来为您找找ELISA试剂盒实验失败的原因究竟是什么?

操作注意:
1. 溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素),在洗涤过程中往往难以完全洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

2. 标本受细菌污染。因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

3. 标本保存不当。在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性;为克服上述干扰,ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。

塑料试管能吸附抗原物质,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。zui好使用真空采血管;并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,EDTA、酶抑制剂可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

标本凝固不全。 在工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

上海古朵生物科技有限公司秉承“信誉、质量、品牌、诚信为本"的理念,以优良的服务质量和实惠的价格,ELISA试剂盒实验前,请仔细阅读中英文说明书,我们提供免费代测,实验过程指导服务,详情咨询上海古朵在线客服。

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