您的ELISA试剂盒实验失败的原因究竟是什么?

现在的elisa试剂盒可谓鱼龙混杂，难辨好坏，因为具有灵敏度高、特异性强，操作方法简便快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点，已经被许多的科研朋友所应用，虽说是操作简便快速，但是稍稍的不注意，实验就可能会失败，今天，上海古朵来为您找找ELISA试剂盒实验失败的原因究竟是什么？

操作注意：
1. 溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以完全洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧（O），从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

2. 标本受细菌污染。因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

3. 标本保存不当。在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；为克服上述干扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。zui好使用真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

标本凝固不全。 在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

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