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古朵生物:lb培养基是什么培养基

发布时间:2019-09-05 阅读:29

培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。那么LB培养基是什么培养基?LB一般被解释为Luria-Bertani,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语lysogeny broth,即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。

LB培养基是一种培养基的名称,是微生物学实验中Z常用的培养基,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.可分为液体培养基和固体培养基。

LB培养基是一种应用Z广泛和Z普通的细菌基础培养基,有时又称普通培养基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。


酵母提取物:酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提,再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末,其中氨基酸含量30%以上,总蛋白50%以上,核苷酸10%以上,广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。

胰化蛋白胨:一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的白色粉末,含有丰富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压),其次是提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基用途

用于一般细菌培养,特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理:
蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
LB培养基配制方法

配制每升培养基,应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入:胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。
LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素,并且倒好板。
LB固体培养基倒板
1.配制:100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。
2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。
3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。
4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。 配400ml的话成分按比例减少就行了,pH还是要按规定的。
LB培养基设计不同的离子对大肠杆菌生长状况的影响

以下方法仅供参考:
1.首先养几个平板固体培养基培养的大肠杆菌,保证这些细菌来自于同一个克隆;
2.采用液体培养并用分光光度计测定浊度来评价大肠杆菌生长。
3.盐可选择氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化锌、铵盐、磷酸盐等;
4.浓度差别可做,可不做;
5.因为分光光度计的准确性有一定要求,培养时间就不能太长,Z多8小时;
根据这些条件设计实验就容易了。大体上是,先配制好各种液体培养基;然后从1中挑一个菌落放到一个起始的基本LB液体培养基,培养到稍微有点浑时,就可以向各种培养基中加同样体积的细菌;Z后就是测定OD值了。记得每个培养基做3个重复管。

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