临床PCR试剂盒的更新换代
自从PCR技术作为临床诊断方法以来，实验室污染一直是影响检测质量的罪魁祸。虽经多次技术改进和换代，实验室污染就像冬季的雾霾很难彻底去除，特别是“自动化核酸提取仪”在临床应用，如果进行严格的污染监控，几乎所有的核酸提取仪器都会沦陷。这也许是我们无颜去响应欧肝会（HBV DNA<10~15IU/mL）或美肝会HBV DNA<5~10IU/mL）倡导的灵敏性。
回顾历次PCR技术的更新换代，似乎都遵循了这样一个规律，那就是新一代试剂盒或多或少会解决上一代技术存在的问题，如检测敏感性逐渐得到提升、检测步骤逐渐得到简化、实验室污染逐渐得到控制，现就PCR技术的历次更新换代分析如下。
di一代试剂盒
即采用电泳法进行结果鉴定，那时实验室人员对污染还没有清楚的认识，当从“饮水中”也扩增出“结核杆菌”时，才意识到问题的严重性，于是1998年卫生部暂停PCR技术在临床诊断中的应用。人们把污染的元凶归结为“电泳”二字，随后出现了“ELISA-PCR”或杂交梳等核酸检测方法，由于同样是产物开放性鉴定，并没有改变污染成灾的事实，反而使人们对PCR技术能否用于临床诊断产生了质疑！
第二代试剂盒
即实时荧光PCR技术的产生，由之前的开放性核酸鉴定方法，变成由荧光染料或Taq MAN探针为信号源的闭管鉴定，避免了扩增产物外泄的实时荧光PCR技术，事实证明实验室污染并没有得到完全控制，于是有些把罪魁祸归结为“煮沸”带来的气溶胶，同时认为“煮沸”得来的核酸干扰物质太多，是影响检测敏感性的主要原因。
第三代试剂盒
即 “微量核酸释放剂”法，2002年本人根据HBV DNA的高度稳定性和对PCR扩增条件要求不高等特点，研发出无需进行核酸提取或纯化的“一步法”HBV DAN检测技术，由于操作方法简单、快速，很受实验室人员欢迎，在接下来的几年里，陆续有试剂厂家获得注册证书。“一步法”避免了煮沸法导致的气溶胶，也简化了操作步骤，但实验室污染也并未因此得到解决，这也是许多人无法理解的问题！
第四代试剂盒
即“磁珠”核酸提取技术，是免疫化学发光自动化技术的应用，促使了核酸自动化的变革，磁珠核酸制备方法实现了仪器批量操作，也就是所谓的自动化。第四代试剂盒与第二代和第三代试剂盒的不同，磁珠法获得的核酸纯度和和得率都较传统方法有大幅度提升，也就出现了“高敏”、“超敏”等名词。其实，磁珠核酸制备方法非但与“柱提法”没有本质区别，反而如果核酸制备过程存在动力混匀、加热、核酸洗脱、移管、磁珠残留等环节，形成污染“PM2.5”的几率远远高于“柱提法“，这也是动态核酸制备无法避免污染的根源所在。罗氏COBAS采用SPU进行核酸制备，在检测量不大的情况下实验室污染并不明显，但其他形式的“全自动或半自动核酸提取仪”，虽然都植入了预防污染的概念，但实践证明，污染均难防难清。
第五代试剂盒
即静态核酸制备技术。该技术的发明算是突破传统的“黑科技”，核酸制备过程直接在PCR扩增管中进行；样本直接加到核酸裂解液中无需混匀（静态加样），同时还避免了吹打混匀导致的核酸丢失；核酸漂洗无需混匀磁珠（静态漂洗）；废液封闭收集；核酸磁珠参与PCR扩增（无核酸磁珠外露）。这种静态核酸制备技术不但实现了“污染可控”，还大大降低了操作技术门槛、提升了PCR检测的稳定性和重复性。
第五代试剂盒的出现，解决了上面四代试剂盒存在的诸多缺陷，zui大的收益是“简单快速”、“实验室污染可控”和“结果的高度重复性”，应该说是临床荧光PCR技术的一场革命。
回顾历次PCR技术的更新换代，似乎都遵循了这样一个规律，那就是新一代试剂盒或多或少会解决上一代技术存在的问题，如检测敏感性逐渐得到提升、检测步骤逐渐得到简化、实验室污染逐渐得到控制，现就PCR技术的历次更新换代分析如下。
di一代试剂盒
即采用电泳法进行结果鉴定，那时实验室人员对污染还没有清楚的认识，当从“饮水中”也扩增出“结核杆菌”时，才意识到问题的严重性，于是1998年卫生部暂停PCR技术在临床诊断中的应用。人们把污染的元凶归结为“电泳”二字，随后出现了“ELISA-PCR”或杂交梳等核酸检测方法，由于同样是产物开放性鉴定，并没有改变污染成灾的事实，反而使人们对PCR技术能否用于临床诊断产生了质疑！
第二代试剂盒
即实时荧光PCR技术的产生，由之前的开放性核酸鉴定方法，变成由荧光染料或Taq MAN探针为信号源的闭管鉴定，避免了扩增产物外泄的实时荧光PCR技术，事实证明实验室污染并没有得到完全控制，于是有些把罪魁祸归结为“煮沸”带来的气溶胶，同时认为“煮沸”得来的核酸干扰物质太多，是影响检测敏感性的主要原因。
第三代试剂盒
即 “微量核酸释放剂”法，2002年本人根据HBV DNA的高度稳定性和对PCR扩增条件要求不高等特点，研发出无需进行核酸提取或纯化的“一步法”HBV DAN检测技术，由于操作方法简单、快速，很受实验室人员欢迎，在接下来的几年里，陆续有试剂厂家获得注册证书。“一步法”避免了煮沸法导致的气溶胶，也简化了操作步骤，但实验室污染也并未因此得到解决，这也是许多人无法理解的问题！
第四代试剂盒
即“磁珠”核酸提取技术，是免疫化学发光自动化技术的应用，促使了核酸自动化的变革，磁珠核酸制备方法实现了仪器批量操作，也就是所谓的自动化。第四代试剂盒与第二代和第三代试剂盒的不同，磁珠法获得的核酸纯度和和得率都较传统方法有大幅度提升，也就出现了“高敏”、“超敏”等名词。其实，磁珠核酸制备方法非但与“柱提法”没有本质区别，反而如果核酸制备过程存在动力混匀、加热、核酸洗脱、移管、磁珠残留等环节，形成污染“PM2.5”的几率远远高于“柱提法“，这也是动态核酸制备无法避免污染的根源所在。罗氏COBAS采用SPU进行核酸制备，在检测量不大的情况下实验室污染并不明显，但其他形式的“全自动或半自动核酸提取仪”，虽然都植入了预防污染的概念，但实践证明，污染均难防难清。
第五代试剂盒
即静态核酸制备技术。该技术的发明算是突破传统的“黑科技”，核酸制备过程直接在PCR扩增管中进行；样本直接加到核酸裂解液中无需混匀（静态加样），同时还避免了吹打混匀导致的核酸丢失；核酸漂洗无需混匀磁珠（静态漂洗）；废液封闭收集；核酸磁珠参与PCR扩增（无核酸磁珠外露）。这种静态核酸制备技术不但实现了“污染可控”，还大大降低了操作技术门槛、提升了PCR检测的稳定性和重复性。
第五代试剂盒的出现，解决了上面四代试剂盒存在的诸多缺陷，zui大的收益是“简单快速”、“实验室污染可控”和“结果的高度重复性”，应该说是临床荧光PCR技术的一场革命。
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