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BCA蛋白浓度测定方法和操作注意事项

发布时间:2019-10-21 阅读:41

BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法,其测定范围是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。

 BCA 蛋白定量测定方法:(96孔板)

1、配制BCA 工作液: 根据标准品和样品数量,按50 体积试剂A,1 体积试剂B 配制适量BCA 工作液,充分混匀。

2、将蛋白标准品按0, 1, 2, 4, 6,8, 10 微升加到96 孔板的蛋白标准品孔中,加灭菌双蒸水补足到10 微升;取10 微升待测样品加入96 孔板。每个测定要做2-3 个平行。

3、向带测样品孔和蛋白标准品孔中加入200 微升BCA工作液(即样品与工作液的体积比为1:20)混匀。

4、37℃温浴30min。冷取至室温。

5、酶标仪562nm 波长下测定吸光度。

6、制作标准曲线,从标准曲线中求出样品浓度。

 BCA 蛋白定量测定操作注意事项:

1、反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外,还与反应的温度有关。如果样品的浓度较高(>50μg/ml),反应温度一般采用37 度。如果样品蛋白质的浓度较低(<50μg),反应的温度为60℃,该温度下,色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化,大大提高检测灵敏度。

2、该方法检测的蛋白质浓度范围20μg-500μg/ml;当蛋白浓度<20ug/ml 时,推荐60℃温浴,并将蛋白液:工作液的比例调至1:8 进行测定(增强法)可以检测到5ug/ml。

试剂A 和B 在室温的稳定期至少1 年以上。标准蛋白液保存在-20℃,短期则4℃保存.

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