古朵新闻：细胞有了支原体怎么办？

    平均有约15~35%细胞实验室发生支原体污染（65~80%严重污染），超过一半实验室有两种支原体污染；而各地的细胞库中，也有发现5~35%不等的支原体感染率，日本甚至高达60%。

    但！目前有在做常规支原体监控的细胞实验室却不到50%！

    支原体为细菌的一类，zui早在1898年由法国 E. Nocard 及 E.R.Roux 从肺疫牛隻中分离出来，1956年才正式命名为支原体 (Mycoplasma)；支原体大小介于细菌与病毒之间 (直径介于0.15-0.3?m)，为目前发现zui小zui简单的原核微生物，唯1可见的胞器是核糖体，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，所以呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态 。

    大多支原体基因组只有0.58－1.38百万碱基，这使得它的生物合成能力薄弱，必须利用本身细胞膜表面高密度的黏附素附着于宿主细胞表面，并交换宿主的细胞质及细胞膜成分，来获取增殖需要的物质。但由于支原体生长条件复杂，使得菌体培养困难重重，导致过去支原体一直不受关注；近几年，拜分子生物学与基因组学的进步所赐，基因构造简单的支原体已引起了较为广大注意。

    至今，共有超过180种支原体被发现，有超过20种能感染体外培养的细胞，而目前实验室zui常见(95% 以上)的支原体则来自其中6种：

    源自于实验人员鼻腔、口腔，并经由飞沫传至培养细胞中的口腔支原体（M.orale）、猪鼻支原体（M.fermentans）及人型支原体（M.hominis），居于位（占总体的50%以上）。

    其次则为大多来自牛血清的精氨酸支原体（M. Arginini）、莱氏无胆甾支原体（A. Laidlawii）、及来自猪源胰酶的猪鼻支原体（M. Hyorhinis）。

    PS：BI胰酶经过辐照，不含活的支原体。

    既然支原体是细菌的一种，抗生素一加不就好了吗?

    为什么可以搞到这么多细胞库污染?

    支原体体积非常小, 易通过0.22um滤膜, 且一般光学显微镜无法观察到。

    支原体能附着并存活在器物表面(操作台, 培养箱,显微镜等), 提高操作污染概率。

    支原体生长缓慢，通常不破坏宿主细胞但默默改变了细胞生长代谢，且对传统抗生素具抗性，因为抗生素大多破坏细菌细胞壁, 而支原体恰恰没有细胞壁。

    支原体污染初期, 培养基不变色, 细胞形态正常，但等大量污染时, 为时已晚, 耗时又耗力。

    你说，支原体烦不烦！

    目前检测方法可大致分成四种：

    ■微生物培养法

    将样品培养在特殊琼脂培养基上，在37?C有氧环境中孵育2周，阳性培养基上会长出100~400um大小的“煎蛋状”菌落。

    ■DNA萤光染色法

    支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），容易被Hoechst 33258此荧光剂染上，被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点。

    ■ELISA法

    将支原体16S核糖体RNA标上标签，然后用特定抗体预包被过的微孔板对标签进行捕获，再加入显色用的抗体及底物，zui后通过比色法得出检测结果。

    ■PCR法

    原理为扩增支原体16S核糖体RNA的基因，能检测多达19种支原体，操作快速、准确性高，市面上有多款相关产品可参考

    消灭支原体依不同处理发法，分成四大类：

    ■物理法：高温高压灭菌

    ■免疫法：使用支原体特异性抗血清、裸鼠传代法

    ■化学法：界面活性剂处理（BI：Pharmacidal 支原体喷壶）

    ■生化法：使用抗生素等药物（BI：BIOMYC 支原体处理试剂）

    目前，大环内酯（Macrolides）、四环素（Tetracyclines）和喹诺酮（Quinolones）这三类抗生素，是公认对抗支原体效果zui佳的药物，而市面上有许多针对不同菌株配置的抗生素产品可以参考。