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培养的NK细胞不满意,哪步出了错?

发布时间:2022-05-05 阅读:29

对培养的NK细胞不满意,是培养基的问题,还是试剂盒的问题?关于NK细胞培养的问题,不能只认为培养基不好或试剂盒不好,很多客户在培养过程中遇到接种密度的问题、补液程序的问题、血浆问题以及样本的问题,所以影响NK细胞培养效果的因素非常之多,下面古朵生物为大家进行排查。

1、血液样本问题

首先确认样本的状态,理论上来讲外周血样本应在抽取的6个小时内进行细胞分离,这个时段细胞是处于好的状态,所以培养前请确认样本是否新鲜,以及血液是否出现溶血现象

血液样本保存时间过长,会导致单核细胞无法成功诱导激活。

血液如在运送过程中溶血,则可能导致血浆分离出现问题,无法后期培养添加。

如用冻存的单个核细胞复苏培养,请确认复苏单个核细胞的活率及状态。

2、接种密度问题

请确保接种的密度在1.5-2x106cells/m L,过低密度会导致细胞前期增殖缓慢,无法达到补液要求。

3、血浆的处理及添加方式

(1)血浆必须要56℃灭活30min,除去多余的纤维蛋白,如有可能冷冻后离心,保证细胞培养时添加的血浆不会有纤维蛋白析出粘连正常细胞。

(2)如有可能有多剩余的血浆,可在后期补入,对于有些状态较差的样本会有好的培养效果。

4、补液原则问题

NK培养受样本差异性影响会很大,所以没有一个固定的补液程序可以指导各种不同的样本。

有的样本激活迅速,生长快速,补液就相对容易,也好扩增,可有的样本前期就长的较慢,如遇到肿瘤患者晚期年老的病人,是难上加难,所以针对不同的样本,我们应该有不同的应对原则:

(1)首先7天以后的补液原则是补液后细胞密度应在0.5-0.8x106cells/m L,如密度达不到,请延迟一天后再进行补液,否则当你细胞补液密度过低时,好的样本可以长起来,那差的样本就会逐渐凋亡,无法继续培养。

(2)对于差的样本,适当增加血浆的添加次数,可以得到好的效果,比如标准程序需要加3-4次血浆,那么有可能的话你可以加到5次。

5、操作原因

(1)补液培养基的温度

培养基补液前应提前预温,过冷的培养基会导致细胞应激反应,出现絮状物;

(2)培养箱环境的剧烈变化

培养箱异常,温度及二氧化碳浓度变化较大会导致细胞死亡,出现絮状物;

(3)细菌、真菌、支原体污染

受到细菌、真菌、支原体污染的细胞生长非常缓慢,甚至不生长;

(4)因子试剂盒经过了反复的冻融

反复冻融会大大降低因子的活性,激活、诱导、扩增等环节都会出现问题,达不到优的效果。

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