浅谈血液样本检测微生物的取样和保存
随着高通量测序技术逐渐成熟,对于人体微生物的了解也越发深入,且研究方向主要都集中在肠道微生物上,其次是口腔、眼睛、皮肤、肺、尿道等微生物分布较多的部位。血液作为一个曾一度被认为是无菌的组织,相关的研究则要落后不少。
由于血液的组成成分比较复杂,因此在采样过程中需要根据具体的实验需求制定不同的取样方法,比较常见的方法为取全血样本进行实验,或是取血液中不同的组分进行实验。
一、全血取样
若研究对象为全血中的微生物,且不需要考虑样本中细胞的活性,可以直接将样本放在-80℃冰箱中保存,如果没有-80℃冰箱,可以短期冻存在-20℃冰箱,也可以在取样后加入抗凝剂EDTA或肝素等,或是直接使用含有抗凝剂的血液采集管,将样本与抗凝剂与充分混匀后放在冰箱中冻存。抗凝剂可以有效地阻止血小板聚集,防止发生凝血,保证细胞的形态在较长的一段时间内不会发生变化。
若还需要考虑样本中微生物的活性,或是要对微生物进行培养的话,则必须使用抗凝剂防止样本凝固,并将样本存放在室温或是4℃冰箱中。此类样本存放的时间不宜过长,建议尽快进行后续的实验。
二、血液中不同组分的取样
若研究对象为血液中的血浆、白细胞或红细胞中的微生物,并且不考虑样本中细胞的活性,则建议在取样后尽快加入抗凝剂并将样本离心,此时样本会分为三层,如下图1所示。
若还需要考虑血液样本中微生物的活性,或是要对微生物进行培养,则建议在血液中加入抗凝剂后将样本置于室温或是4℃冰箱中,待需要进行实验的时候再离心并取出需要的组分。此类样本的存放时间不宜过长,建议尽快进行后续的实验。