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Elisa试剂盒竞争法测抗原步骤及注意事项

发布时间:2022-09-01 阅读:89

  标签:Elisa试剂盒 古朵生物 酶标抗体


  Elisa试剂盒竞争法测抗原步骤及注意事项


  当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。

  Elisa试剂盒 实验步骤

  1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。

  2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。

  3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。

  4. 重复第2步。

  5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。

  6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。

  注意事项

  1. 每次实验均应做阴性对照、阳性对照及空白对照(以PBS代替标本),后者为本底值,在分析实验结果时应扣除本底值,阳性对照<阴性对照<空白对照实验成立。

  2. 一般认为小分子抗原宜用本法检测,而大分子抗原则宜采用夹心法检测,但具体宜采用哪种方法应根据试验决定,本发与夹心法相比在操作上减少一步。包被抗体与酶标抗体如果分别采用单克隆抗体和多克隆抗体时,宜用单克隆抗体作为包被抗体,以多克隆抗体作为酶标抗体。

  3. 血清标本中抗原浓度一般较低,故一般用原倍标本进行检测,必要时可进行稀释测定,但应重新摸索酶标抗原的浓度,以确保方法的灵敏性。

  4. 以酶标记抗原的方法同酶标记抗体。

  5. 其它注意事项同酶联免疫间接法。

 Elisa试剂盒竞争法测抗原步骤及注意事项 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。

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