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血清总补体溶血活性(CH50)测定操作说明

发布时间:2022-09-16 阅读:87

  标签:血清总补体溶血活性 古朵生物 绵羊红细胞


  血清总补体溶血活性(CH50)测定操作说明


  血清总补体溶血活性(CH50)实验原理 利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时,二者之间近似直线关系,故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以CH50U/ml表示。

  本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关。

  1.试剂及配制

  (1)缓冲生理盐水:

  ①贮存液: lNa2HPO4•12H2O 2.85g lKH2PO4

  0.27g(加蒸馏水至100毫升,4℃保存) lNaCl17.00g

  ②应用液(缓冲液):5毫升贮存液加95毫升蒸馏水,再加10%硫酸镁0.1毫升。当日配制。12小时内使用。

  (2)2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次,并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

  (3)冻干绵羊红细胞溶血素(规格:0.5ml/瓶,0.5ml蒸馏水复溶):将本品(效价1:4000),用缓冲液作1:2000倍稀释(即0.5ml溶血素加999.5毫升缓冲液)。

  (4)待测血清:新鲜血液室温放置30分钟,再4℃放置60分钟,使血块收缩。4℃离心(3000r/min)10分钟,取上清,-20℃保存。

  2.试管法操作步骤(改良Mayer法)

  (1)致敏羊红细胞:2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置37℃水浴30分钟。

  (2)稀释血清:待测血清0.2ml,加缓冲液3.8ml,稀释度为1:20。

  (3)配制溶血标准管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水,混匀,即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2ml,即为50%溶血管。

  (4)按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置37℃水浴30分钟。第10管为非溶血对照。

  (5)结果测定:取出试管,2000r/min离心10分钟,对照管应不溶血。肉眼比色,选与50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长542nm、0.5cm比色杯)OD值,确定与标准管接近者为终点管,然后按下公式计算CH50值:血清补体CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀释度。 如第5管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

  血清总补体溶血活性(CH50)测定操作说明 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。

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