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古朵简述:皮质醇ELISA试剂盒常见的定量方法

发布时间:2022-11-11 阅读:99

  古朵简述:皮质醇ELISA试剂盒常见的定量方法


  测定原理:现在皮质醇ELISA试剂盒除非是测定抗体的以外,一般使用的是双抗体夹心法,此种方法大多数用的是增强的双抗体夹心法,即使用生物素-亲和素系统,还有少数的指标可能使用竞争法,这类方法适用于半抗原的测定。

  具有复杂结构的多表位蛋白抗原,其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗,否则背景很高。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位),那么测定的线性范围就较宽,试剂盒性能就较好;一个用单抗,一个用多抗,测定的灵敏度会较高。

  某些简单的化合物用皮质醇ELISA试剂盒测定时,因为没有两个或以上的表位,一般只能作为半抗原,只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、等)用双抗体夹心法作测定原理时,这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。

  一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形,随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后,测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色,即所谓的“钩状效应”(hookeHect),也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”(zonephenomenon)。所以当使用一步双抗体夹心法时,样品浓度太高,有时会出现测不出来的现象,此时要作适当的稀释才能准确测定。

  皮质醇ELISA试剂盒的组成:用双抗体夹心法作为测定的方法时,试剂盒的组成一般包括:已包被单抗的酶标板:一块,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,外面有铝箔袋密封,打开后有干燥剂,实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。

  皮质醇ELISA试剂盒操作步骤

  1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

  2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

  3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

  4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

  5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

  6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。

  7、温育:重复4的操作。

  8、洗板:重复5的操作。

  9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。

  10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

  11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

  12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

  古朵简述:皮质醇ELISA试剂盒常见的定量方法古朵生物长期经营多重免疫荧光试剂与技术服务、大鼠ELISA试剂盒、人ELISA试剂盒小鼠elisa试剂盒,sigma,amresco等大品牌试剂、为客户提供免费代测ELISA试剂盒服务,我们将全心全意服务好每一位客户!古朵与您共创科研未来!

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