【古朵生物】免疫组化如何选择使用封闭血清？
【古朵生物】免疫组化如何选择使用封闭血清？
做免疫组化时，一般都会封闭。以减少假阳性。
封闭主要是用于封去切片上一些非特异性吸附。用一种非特异性的蛋白，把那些容易吸附蛋白的空间和位点占起来，这样，加上抗体时，抗体只能与对应的抗原去结合了。
一般封闭可以用5%的BSA，这个价格便宜，而且效果还行。但理论上，用与二抗同来源的正常血清会好。
比如，一抗为国产的兔抗IL-2，二抗用标记的羊抗兔IgG。那么，封闭血清就选择与二抗同来源的正常羊血清（一般为山羊）。而同理，如果一抗为羊抗IL-2，二抗可以选标记的兔抗羊IgG，封闭血清选择正常兔血清。
使用时，可以用PBS将正常血清稀释20倍，直接滴加在切片上，37℃度10-30分钟，直接甩掉，不洗，轻轻的吸一下旁边的液体，再加一抗。听说4℃过夜比起37℃两小时背景会干净一些。当然，时间也会长一些。
古朵生物阐述：免疫组化中的血清封闭原理
先加一抗后再封闭的话，一抗就会结合到固相表面上，这种结合力是非特异性的疏水作用力，这种作用力是比较强的，经过处理的固相表面如硝酸纤维膜，酶标板对蛋白的吸附力强，你再去封闭就没有作用了。
当然，也不是说封闭蛋白就完全不会封闭掉一抗的蛋白结合位点，在蛋白过量的条件下，蛋白质之间会有黏附和堆积作用，但这种作用通常是不稳定的。
如果你所选择的一抗与固相抗原亲和力较高，在适合的buffer条件下，一抗会竞争它的结合位点。蛋白质之间那点黏附和堆积作用力当然竞争不过它啦。
"组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。有效方法是在用抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20)封闭组织上带电荷基团而除去与抗体非特异性结合。必要时可加入2%~5%牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为10~20min。也可用除制备抗体以外的其它动物血清(非免疫的)。有明显溶血的血清不能"
"对消除背景的非特异性染色有很好的效果。当然使用特异性高、效价高的
抗体是重要的条件。"
"抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子间的引力参与发生的。这种反应没有化学键的形成。抗原-抗体的结合是可逆的“
抗原-抗体上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨；牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针
做免疫组化时，一般都会封闭。以减少假阳性。
封闭主要是用于封去切片上一些非特异性吸附。用一种非特异性的蛋白，把那些容易吸附蛋白的空间和位点占起来，这样，加上抗体时，抗体只能与对应的抗原去结合了。
一般封闭可以用5%的BSA，这个价格便宜，而且效果还行。但理论上，用与二抗同来源的正常血清会好。
比如，一抗为国产的兔抗IL-2，二抗用标记的羊抗兔IgG。那么，封闭血清就选择与二抗同来源的正常羊血清（一般为山羊）。而同理，如果一抗为羊抗IL-2，二抗可以选标记的兔抗羊IgG，封闭血清选择正常兔血清。
使用时，可以用PBS将正常血清稀释20倍，直接滴加在切片上，37℃度10-30分钟，直接甩掉，不洗，轻轻的吸一下旁边的液体，再加一抗。听说4℃过夜比起37℃两小时背景会干净一些。当然，时间也会长一些。
古朵生物阐述：免疫组化中的血清封闭原理
先加一抗后再封闭的话，一抗就会结合到固相表面上，这种结合力是非特异性的疏水作用力，这种作用力是比较强的，经过处理的固相表面如硝酸纤维膜，酶标板对蛋白的吸附力强，你再去封闭就没有作用了。
当然，也不是说封闭蛋白就完全不会封闭掉一抗的蛋白结合位点，在蛋白过量的条件下，蛋白质之间会有黏附和堆积作用，但这种作用通常是不稳定的。
如果你所选择的一抗与固相抗原亲和力较高，在适合的buffer条件下，一抗会竞争它的结合位点。蛋白质之间那点黏附和堆积作用力当然竞争不过它啦。
"组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。有效方法是在用抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20)封闭组织上带电荷基团而除去与抗体非特异性结合。必要时可加入2%~5%牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为10~20min。也可用除制备抗体以外的其它动物血清(非免疫的)。有明显溶血的血清不能"
"对消除背景的非特异性染色有很好的效果。当然使用特异性高、效价高的
抗体是重要的条件。"
"抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子上的抗原决定簇相互吸引以及多种分子间的引力参与发生的。这种反应没有化学键的形成。抗原-抗体的结合是可逆的“
抗原-抗体上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨；牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针
