细菌简单染色实验方法@古朵新闻
古朵详述实验方法原理:
常用碱性染料进行简单染色,这是因为:在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时,其分子的染色部分带正电荷)。因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下易于识别,常用作简单染色的染料有:美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
实验材料:
枯草芽孢杆菌(12-18 h营养琼脂斜面培养物)藤黄微球菌(约24 h营养琼脂斜面培养物)
试剂、试剂盒:
吕氏碱性美蓝染液/草酸按结晶紫染液齐氏石-炭酸复红染液
仪器、耗材:
显微镜酒精灯载玻片接种环双层瓶(内装香柏油和二甲-苯)擦镜纸生-理盐水
实验步骤:
1.涂片
取两块载玻片,各滴一小滴(或用接种环挑取1~2环)生-理盐水(或蒸馏水)于玻片中央,用接环以无菌操作(图IV-1)分别从枯草芽泡杆菌和藤黄微球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀井涂成薄膜。若用菌悬液(或液体培养物)涂片可用接种环挑取2~3环直接涂于载玻片上。
2.干燥
室温自然干燥。
3.固定
涂面朝上,通过火焰2~3次。
此操作过程称热固定,其目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态。并使之牢固附着在载玻片上。
4.染色
将玻片平放于玻片搁架上,滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。吕氏碱性美蓝染色1~2 min,石-炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约1 min。
5.水洗
倒去染液。用自来水冲洗,直至涂片上流下的水无色为止。
6.干燥
自然干燥,或用电吹风吹干,也可用吸水纸吸干。
7.镜检
涂片干后镜检。
注意事项:
1.载玻片要洁净无油斑,滴生-理盐水和取菌不宜过多,涂片要涂抹均匀。不宜过厚。
2.热固定温度不宜过高(以玻片背面不烫手为宜),否剿会改变甚至破坏细胞形态。
3.水洗时不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急、过大,以免涂片薄膜脱落。
4.涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。
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