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人唾液皮质醇ELISA试剂盒操作说明

发布时间:2023-05-31 阅读:248

  人唾液皮质醇ELISA试剂盒操作说明


  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人唾液皮质醇的含量。

  有效期:6个月

  保存条件:2-8℃

  人唾液皮质醇ELISA试剂盒实验原理

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人唾液皮质醇捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人唾液皮质醇呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  人唾液皮质醇ELISA试剂盒样本处理及要求

  血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

  注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

  需要而未提供的试剂和器材

  酶标仪(450nm)

  加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒温箱

  蒸馏水或去离子水

  注意事项

  严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

  洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

  消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

  底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

  避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

  在储存和温育时避免强光直接照射。

  平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

  任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

  不能使用过期产品。

  如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

  试剂准备

  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  操作步骤

  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

  实验结果计算

  以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

  试剂盒性能

  检测范围:3.75 ng/mL – 120 ng/mL。

  灵敏度:低检测浓度小于0.1 ng/mL。

  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

  重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

  ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

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