ELISA试剂盒操可能会出现的问题及解决办法
ELISA试剂盒操可能会出现的问题及解决办法
>> 问题显色淡，灵敏度偏低
可能原因
1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高
2、试剂盒未充分平衡
3、培养箱温度不足37℃
4、保温时间不足
5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加
6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁
7、蒸馏水水质有问题
8、底物作用时间不足
问题可能原因解决方法
尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温
试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意
校正定时钟准确定时
按试剂盒说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数
校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，好一次性使用
使用新鲜合格的蒸馏水
准确定时
>> 背景深，全部呈有色
可能原因
1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留
2、样品污染
3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长
4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不
5、蒸馏水被污染
6、酶等试剂混用
7、一次实验的标本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长
解决方法
浓缩洗液准确配制;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤，拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染
样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染
调整培养箱温度，准确定时
吸嘴尽可能一次性使用
使用新鲜蒸馏水
不同批号试剂勿混用
合理安排实验，避免几块酶标板同时加样
>> 重复性不佳
可能原因
1、样品数量多少不一，加样时间有长有短
2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致
3、加样量不一致
解决方法
重复某一样品时，加样时间尽可能与次接近
重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性
样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
>> 出现白板，阳性对照不显色
可能原因
1、显色液变质
2、洗涤液配制有误
3、未加酶结合物而认为已加入
4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用
解决方法
换新的显色液
请按试剂盒说明书所示稀释倍数配制
注意不要漏加
每次加液前均应看清标签
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