古朵介绍：关于常见细胞裂解液及其组分
古朵介绍：关于常见细胞裂解液及其组分
在许多细胞内蛋白表达、纯化及蛋白-蛋白互作等免疫实验(如WB、IP、Co-IP、ChIP)中，细胞裂解是关键一步。
基本介绍
根据不同细胞类型、蛋白定位及下游应用，需要不同的细胞裂解液进行细胞裂解及蛋白提取(表1)。
表1 根据不同蛋白定位选择裂解液
蛋白定位 裂解液
全细胞 NP-40、RIPA
细胞质(可溶性蛋白) Tris-HCl
细胞质(细胞骨架等不溶性蛋白) Tris-Triton
细胞膜 NP-40、RIPA
细胞核 RIPA
线粒体 RIPA
差异化比较
RIPA裂解液
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，获得的蛋白样品可用于常规WB、IP等实验。
组分：25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)。
IP裂解液
IP裂解液是一种改良后的RIPA裂解液，具中等强度效力，可高效溶解细胞蛋白，但不会像RIPA一样释放染色体组DNA或破坏蛋白复合物。适合下游免疫沉淀或亲和吸附应用。
组分：25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。
NP-40裂解液
NP-40裂解液是一种很温和的非离子型去垢剂，与蛋白结合力强，尤其适用于膜蛋白非变性条件下的溶解。
组分：50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化钠、1%NP-40;加蛋白酶抑制剂：抑肽酶、亮肽素、胃抑素，每种1μg / ml;使用前立即添加1mM PMSF。
Tris-Triton裂解液
Tris-Triton裂解液是非离子型表面活性剂，效力介于NP-40和SDS之间，下游应用有WB、ELISA、IP。
组分：10mM 三羟甲基氨基甲w(Tris)，pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧胆酸钠。
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