古朵技术教您一次学会免疫荧光抗体的选择小技巧

  古朵技术教您一次学会免疫荧光抗体的选择小技巧

  一、根据样本选择一抗：

  一抗选择需满足IF应用，一抗种属应尽量选择与检测样本不同来源，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。

  举例：检测小鼠样本，则尽量避免选择小鼠或大鼠源的一抗(如果选了同种属一抗建议加个同型对照)，好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子(荧光素、生物素等)的抗兔IgG。

  二、根据一抗种属选择二抗：

  根据一抗类型与亚型：如果一抗是IgM，就选择抗IgM二抗。

  二抗的类型：细胞或组织表达Fc受体较高，全长二抗的Fc端容易与Fc受体结合，选择F(ab)2片段抗体避免非特异性结合。

  二抗的纯化方式：经交叉吸附处理的二抗在纯化后再次通过固定了其他种属的血清或抗体的纯化柱，降低种属间交叉反应，在多色分析具有突出的优势。

  荧光基团：选择光谱不重叠且稳定明亮的荧光基团;颜色搭配时也要适当考虑强弱搭配。

  3大技巧：

  对于多色分析，原则上一抗尽量来源于不同种属，且荧光标记二抗与一抗的种属要匹配，避免二抗发生交叉反应;两种抗体荧光素的光谱重叠效应应小。

  实验前好先验证单标对特定组织或细胞是否有效，再进行多标实验。

  如果采用TSA技术，则不需要考虑一抗种属来源问题

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