莱克多巴胺快速检测试剂盒

   莱克多巴胺快速检测试剂盒是我司的热销产品之一，上海古朵生物科技有限公司是集研制开发、销售、fu务于一体的高新技术企业,公司产品涉及临床快速诊断试剂、食品安全检测剂，du品快速检测，动物疾病防疫检测试剂，免疫诊断试剂、临床血液学和体液学检验试剂、微生物检验试剂、分子生物学检验试剂、临床生化试剂、有机试剂等众多领域。

名称：莱克多巴胺快速检测试剂盒
供应商：古朵生物
产地：国产|进口
样本： 猪、牛、羊等肌肉和肝脏组织，尿样、血清、饲料等
适应物种： 猪、牛、羊等肌肉和肝脏组织，尿样、血清、饲料等
应用： 药物残留检测
检测方法： 酶联免疫法
检测限： 0.1ppb/0.05ppb
产品规格：96T×1/盒
保质期：12个月
储藏：于2～8℃避光保存。

莱克多巴胺快速检测试剂盒操作说明  1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的莱克多巴胺，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的莱克多巴胺和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含莱克多巴胺含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中莱克多巴胺的残留量。

2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：  0.05ppb(ng/ml)
2.2 检测下限：
    尿液样本  …………………………… 0.05ppb
组织（处理方法一）………………… 0.2ppb
肌肉样本（处理方法二）…………… 0.05ppb
肝脏样本（处理方法二）…………… 0.1ppb
饲料样本………………………………0.5ppb
2.3 交叉反应率：
莱克多巴胺  …………………………
多巴酚丁胺  ………………………… < 1%
克伦特罗    ………………………… <0.1%
沙丁胺醇    ………………………… <0.1%

3 试剂盒组成
酶标板………………………………96孔/板
标准液（绿盖）：0 ppb、0.05ppb、0.15ppb、 0.45ppb、 1.35ppb、 4.05ppb………各1ml    
高标准液（红盖）：100ppb………1ml
酶标记物 (红盖)…………………………7ml
抗体工作液 (蓝盖)………………………10ml
底物液A (白盖)…………………………7ml
底物液B(黑盖) …………………………7ml
终止液(黄盖) ……………………………7ml
20X浓缩洗涤液(透明盖)………………40 ml
10X复溶液(黄盖)…………………………50 ml
说明书 …………………………………1份

4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 试剂：正己烷、乙腈、甲醇、无水硫酸钠

5 溶液的配制
5.1 试验前用去离子水将20X浓缩洗涤液稀释成工作洗涤液。（19份离子水+1份20X浓缩洗涤液）
5.2 试验前用去离子水将10X复溶液稀释成工作复溶液。（9份离子水+1份10X复溶液）

6 样本前处理方法
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
6.1 尿样本处理方法
直接取50µl清亮尿样进行测定（浑浊尿样需要过滤或经4000r/min离心5min，以得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。
尿样本稀释倍数：1    检测下限：0.05ppb
6.2 组织样本处理方法一
    称取均质后的组织样本2±0.05g ，加入6ml复溶液，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min。取50µl上清液进行分析。
样本稀释倍数：4    检测下限：0.2ppb
6.3 组织样本（肌肉和肝脏）处理方法二
称取均质后的组织样本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min。取上清液5ml，在56℃条件下氮气或空气流吹至完全干燥；
6.3.1 肌肉样本：加入1ml 复溶液混合振荡30s，取50µl用于分析。
肌肉样本稀释倍数：1    检测下限：0.05ppb
6.3.2 肝脏样本：加入2ml正己烷振荡溶解，再加入1ml 去离子水混合振荡30s，室温4000r/min以上离心5min，去除上层；取50µl下层与50µl复溶液混匀；取50µl用于分析。
肝样本稀释倍数：2    检测下限：0.1ppb
6.4 饲料样本
称取均质后的饲料样品1.0±0.05g，加入10ml甲醇，再加入5g无水硫酸钠，振荡2min；室温 4000r/min以上离心10min；
吸出离心后的上清液1ml，于56℃氮气吹干，用1 ml复溶液溶解干燥的残留物，再加入1mL正己烷混合30s；室温4000r/min以上离心5min。
取50µl下层进行分析。
样本稀释倍数：10    检测下限：0.5ppb

7 酶联免疫试验步骤
    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
7.1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
7.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl /孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。
7.3 洗    涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7.4 显    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。
7.5 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。
7.6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应终止反应后在10分钟内完成。

8 结果分析
8.1 百分吸光率的计算
    标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第1个标准（0ppb）的吸光度值，再乘以，即
 百分吸光度值（%）＝    A    ×
    A0    
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
8.2 标准曲线的绘制与计算
    以标准品百分吸光率为纵坐标，对应的标准品浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准品的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
 

 
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月)。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。

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